Китайская фармакопея (издание 2020 г.) требует, чтобы метанольный экстракт YCH составлял не менее 20,0% [2], без указания других показателей оценки качества. Результаты этого исследования показывают, что содержание метанольных экстрактов диких и культивируемых образцов соответствовало фармакопейному стандарту, и между ними не было существенной разницы. Таким образом, по этому показателю не было очевидной разницы в качестве между дикими и культивируемыми образцами. Однако содержание суммы стеринов и суммы флавоноидов в диких образцах было значительно выше, чем в культивируемых образцах. Дальнейший метаболомный анализ выявил большое разнообразие метаболитов между дикими и культивируемыми образцами. Кроме того, было отобрано 97 существенно различных метаболитов, которые перечислены вДополнительная таблица S2. Среди этих значительно отличающихся метаболитов — β-ситостерин (ID: M397T42) и производные кверцетина (M447T204_2), которые, как сообщается, являются активными ингредиентами. Среди дифференциальных метаболитов также были включены ранее не зарегистрированные компоненты, такие как тригонеллин (M138T291_2), бетаин (M118T277_2), фустин (M269T36), ротенон (M241T189), арктиин (M557T165) и логановая кислота (M399T284_2). Эти компоненты играют различную роль в антиоксидантной, противовоспалительной, очистке свободных радикалов, противораковой и лечении атеросклероза и, следовательно, могут представлять собой предполагаемые новые активные компоненты YCH. Содержание активных ингредиентов определяет эффективность и качество лекарственного сырья.7]. Таким образом, метаноловый экстракт как единственный показатель оценки качества YCH имеет некоторые ограничения, и необходимо дальнейшее изучение более конкретных маркеров качества. Были значительные различия в общем количестве стеринов, общих флавоноидов и содержании многих других дифференциальных метаболитов между диким и культивируемым YCH; таким образом, между ними потенциально существовали некоторые качественные различия. В то же время недавно обнаруженные потенциальные активные ингредиенты YCH могут иметь важное справочное значение для изучения функциональной основы YCH и дальнейшего развития ресурсов YCH.
Важность настоящего лекарственного сырья уже давно признана в конкретном регионе происхождения для производства китайских лекарственных трав превосходного качества.
8]. Высокое качество является неотъемлемым атрибутом настоящих лекарственных материалов, а среда обитания является важным фактором, влияющим на качество таких материалов. С тех пор, как YCH начали использовать в качестве лекарства, в нем долгое время доминировал дикий YCH. После успешного внедрения и одомашнивания YCH в Нинся в 1980-х годах источник лекарственных материалов Иньчайху постепенно сместился от дикого к культивируемому YCH. Согласно предыдущему расследованию источников YCH [
9] и полевых исследований нашей исследовательской группы, имеются существенные различия в ареалах распространения культивируемого и дикорастущего лекарственного сырья. Дикий YCH распространен в основном в Нинся-Хуэйском автономном районе провинции Шэньси, прилегающем к засушливой зоне Внутренней Монголии и центральной Нинся. В частности, пустынная степь в этих районах является наиболее подходящей средой обитания для роста YCH. Напротив, культивируемый YCH в основном распространен к югу от ареала дикого распространения, например, в округе Тунсинь (Культивируемый I) и прилегающих к нему районах, который стал крупнейшей базой выращивания и производства в Китае, а также в округе Пэнъян (Культивируемый II). , который расположен в более южной части и является еще одним районом производства культивируемого YCH. При этом ареалы двух вышеуказанных посевных площадей не являются пустынной степью. Поэтому, помимо способа производства, существуют также существенные различия в среде обитания дикого и культивируемого ЮЧ. Среда обитания является важным фактором, влияющим на качество растительного лекарственного сырья. Различные среды обитания будут влиять на образование и накопление вторичных метаболитов в растениях, тем самым влияя на качество лекарственных препаратов [
10,
11]. Таким образом, существенные различия в содержании общих флавоноидов и общих стеринов, а также в экспрессии 53 метаболитов, которые мы обнаружили в этом исследовании, могут быть результатом управления полями и различий в среде обитания.
Одним из основных способов влияния окружающей среды на качество лекарственных материалов является воздействие на исходные растения. Умеренный экологический стресс имеет тенденцию стимулировать накопление вторичных метаболитов.
12,
13]. Гипотеза баланса роста/дифференциации утверждает, что, когда питательных веществ имеется в достаточном количестве, растения в первую очередь растут, тогда как при дефиците питательных веществ растения в основном дифференцируются и производят больше вторичных метаболитов.
14]. Стресс засухи, вызванный дефицитом воды, является основным экологическим стрессом, с которым сталкиваются растения в засушливых районах. В этом исследовании состояние воды культивируемого YCH более обильное, при этом годовые уровни осадков значительно выше, чем у дикого YCH (запас воды для культивируемого I был примерно в 2 раза больше, чем для дикого; культивируемый II был примерно в 3,5 раза больше, чем для дикого YCH). ). Кроме того, почва в дикой природе — песчаная, а почва на сельскохозяйственных угодьях — глинистая. По сравнению с глиной песчаная почва обладает плохой способностью удерживать воду и с большей вероятностью усугубляет стресс от засухи. При этом процесс выращивания часто сопровождался поливом, поэтому степень засушливого стресса была низкой. Дикий YCH растет в суровых природных засушливых средах обитания и поэтому может пострадать от более серьезного стресса от засухи.
Осморегуляция является важным физиологическим механизмом, с помощью которого растения справляются со стрессом, вызванным засухой, а алкалоиды являются важными осмотическими регуляторами у высших растений.
15]. Бетаины представляют собой водорастворимые алкалоидные соединения четвертичного аммония и могут действовать как осмопротекторы. Стресс засухи может снизить осмотический потенциал клеток, в то время как осмопротекторы сохраняют и поддерживают структуру и целостность биологических макромолекул и эффективно смягчают ущерб, нанесенный растениям стрессом засухи.
16]. Например, в условиях засухи содержание бетаина в сахарной свекле и Lycium barbarum значительно увеличилось.
17,
18]. Тригонеллин является регулятором роста клеток, и в условиях засухи он может увеличивать продолжительность клеточного цикла растений, ингибировать рост клеток и приводить к уменьшению объема клеток. Относительное увеличение концентрации растворенных веществ в клетке позволяет растению достичь осмотической регуляции и повысить его способность противостоять стрессу, вызванному засухой.
19]. Цзя Х [
20] обнаружили, что с увеличением стресса от засухи Astragalus membranaceus (источник традиционной китайской медицины) производит больше тригонеллина, который регулирует осмотический потенциал и улучшает способность противостоять стрессу от засухи. Также было показано, что флавоноиды играют важную роль в устойчивости растений к стрессу засухи.
21,
22]. Большое количество исследований подтвердило, что умеренный стресс от засухи способствует накоплению флавоноидов. Ланг Дуо-Ён и др. [
23] сравнили влияние стресса, вызванного засухой, на YCH, контролируя водоудерживающую способность в поле. Установлено, что стресс засухи в определенной степени подавляет рост корней, но при умеренном и сильном стрессе засухи (40% полевой водоудерживающей способности) общее содержание флавоноидов в YCH увеличивается. Между тем, в условиях засухи фитостерины могут регулировать текучесть и проницаемость клеточных мембран, подавлять потерю воды и повышать устойчивость к стрессу.
24,
25]. Таким образом, повышенное накопление общего количества флавоноидов, общих стеринов, бетаина, тригонеллина и других вторичных метаболитов в диком YCH может быть связано с высокоинтенсивным стрессом, вызванным засухой.
В этом исследовании анализ обогащения пути KEGG был проведен на метаболитах, которые, как было обнаружено, значительно различались между диким и культивируемым YCH. К обогащенным метаболитам относились те, которые участвуют в путях метаболизма аскорбата и алдарата, биосинтеза аминоацил-тРНК, метаболизма гистидина и метаболизма бета-аланина. Эти метаболические пути тесно связаны с механизмами устойчивости растений к стрессу. Среди них метаболизм аскорбата играет важную роль в производстве антиоксидантов в растениях, метаболизме углерода и азота, устойчивости к стрессу и других физиологических функциях.
26]; Биосинтез аминоацил-тРНК является важным путем образования белка.
27,
28], который участвует в синтезе стрессоустойчивых белков. И гистидиновый, и β-аланиновый пути могут повысить устойчивость растений к стрессу окружающей среды.
29,
30]. Это также указывает на то, что различия в метаболитах между диким и культивируемым YCH были тесно связаны с процессами стрессоустойчивости.
Почва является материальной основой роста и развития лекарственных растений. Азот (N), фосфор (Р) и калий (К) в почве являются важными питательными элементами для роста и развития растений. Органическое вещество почвы также содержит N, P, K, Zn, Ca, Mg и другие макроэлементы и микроэлементы, необходимые для лекарственных растений. Избыток или недостаток питательных веществ или несбалансированное соотношение питательных веществ влияют на рост и развитие, а также на качество лекарственных материалов, а разные растения имеют разные потребности в питательных веществах.
31,
32,
33]. Например, стресс с низким содержанием азота способствовал синтезу алкалоидов у Isatis indigotica и был полезен для накопления флавоноидов в таких растениях, как Tetrastigma hemsleyanum, Crataegus pinnatifida Bunge и Dichondra repens Forst. Напротив, слишком большое количество N ингибировало накопление флавоноидов у таких видов, как Erigeron breviscapus, Abrus cantoniensis и Ginkgo biloba, и влияло на качество лекарственных материалов.
34]. Внесение Р-удобрения эффективно повышало содержание глицирризиновой кислоты и дигидроацетона в солодке уральской [
35]. Когда количество внесения превышало 0,12 кг·м-2, общее содержание флавоноидов в Tussilago Farfara снижалось [
36]. Внесение фосфорных удобрений отрицательно повлияло на содержание полисахаридов в корневище многогонатного, используемом в традиционной китайской медицине.
37], но калийное удобрение эффективно увеличивает содержание сапонинов [
38]. Внесение 450 кг·ч·м-2 К удобрения было лучшим для роста и накопления сапонинов двухлетнего Panax notoginseng [
39]. При соотношении N:P:K = 2:2:1 суммарное количество гидротермального экстракта, гарпагида и гарпагозида было наибольшим [
40]. Высокое соотношение N, P и K способствовало росту Pogostemon cablin и увеличению содержания эфирного масла. Низкое соотношение N, P и K повышало содержание основных эффективных компонентов масла стеблевых листьев Pogostemon cablin [
41]. YCH является растением, устойчивым к бесплодной почве, и у него могут быть особые потребности в питательных веществах, таких как N, P и K. В этом исследовании, по сравнению с культивируемым YCH, почва диких растений YCH была относительно бесплодной: содержание почвы органического вещества, общий N, общий P и общий K составляли примерно 1/10, 1/2, 1/3 и 1/3 от содержания культурных растений соответственно. Следовательно, различия в питательных веществах почвы могут быть еще одной причиной различий между метаболитами, обнаруженными в культивируемом и диком YCH. Вейбао Ма и др. [
42] обнаружили, что внесение определенного количества азотных и фосфорных удобрений значительно улучшает урожайность и качество семян. Однако влияние питательных элементов на качество YCH неясно, а меры по внесению удобрений для улучшения качества лекарственного сырья требуют дальнейшего изучения.
Китайские лекарственные травы обладают следующими характеристиками: «Благоприятная среда обитания способствует урожайности, а неблагоприятная среда обитания улучшает качество» [
43]. В процессе постепенного перехода от дикого YCH к культурному ареал обитания растений изменился от засушливой и бесплодной пустынной степи к плодородным сельскохозяйственным угодьям с более обильным количеством воды. Среда обитания культивируемого YCH превосходна, а урожайность выше, что способствует удовлетворению рыночного спроса. Однако эта превосходная среда обитания привела к значительным изменениям в метаболитах YCH; способствует ли это улучшению качества YCH и как добиться высококачественного производства YCH с помощью научно обоснованных мер по выращиванию, потребуют дальнейших исследований.
Моделирование среды обитания — это метод моделирования среды обитания и условий окружающей среды дикорастущих лекарственных растений, основанный на знаниях о долгосрочной адаптации растений к конкретным экологическим стрессам.
43]. Моделируя различные факторы окружающей среды, влияющие на дикие растения, особенно на первоначальную среду обитания растений, используемых в качестве источников аутентичных лекарственных материалов, этот подход использует научные разработки и инновационное вмешательство человека, чтобы сбалансировать рост и вторичный метаболизм китайских лекарственных растений.
43]. Методика направлена на достижение оптимальных условий разработки высококачественного лекарственного сырья. Моделирование культивирования в среде обитания должно обеспечить эффективный способ высококачественного производства YCH, даже если фармакодинамическая основа, маркеры качества и механизмы реакции на факторы окружающей среды неясны. Соответственно, мы предлагаем, чтобы научное проектирование и меры по управлению полями при выращивании и производстве YCH осуществлялись с учетом экологических характеристик дикого YCH, таких как засушливые, бесплодные и песчаные почвенные условия. В то же время есть надежда, что исследователи проведут более глубокие исследования функциональной материальной основы и показателей качества YCH. Эти исследования могут обеспечить более эффективные критерии оценки YCH, а также способствовать высококачественному производству и устойчивому развитию отрасли.